細胞株通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數有限，稱為有限細胞株；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細胞株。對于人類腫瘤細胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

　　細胞株的建株實例講解：

　　一、腫瘤細胞培養(yǎng)技術要點

　　1.取材：材料主要來源于外科手術或活檢瘤組織，取材時避免用壞死組織，要挑選瘤細胞集中和活力較好的部位，瘤性轉移淋巴結或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。

　　2.成纖維細胞排除：在腫瘤組織中常混雜有一些成纖維細胞，培養(yǎng)時能與瘤細胞同時生長，并常壓過癌細胞，導致癌細胞生長受阻以至消失，應仔細排除。

　　排除方法常有：機械刮除法、反復貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。

　　3.提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率

　　根據實驗經驗，腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。一般當腫瘤組成或細胞被原代培養(yǎng)后，要經過對新環(huán)境的適應才能生長，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施。如用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細胞底層等。用細胞生長因子，根據細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子，如胰島素、雌激素等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。

　　二、人類淋巴母細胞建株方法

　　1.取4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640。

　　2.混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min。

　　3.1500rpm，15min，吸取白細胞層于另一離心管中。

　　4.加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次。

　　5.將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EB（EB病毒）液，混勻。

　　6.水浴搖床，40次/分，37℃，3hr。

　　7.1500rpm，15min。將細胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素，輕輕混勻，37℃培養(yǎng)。

　　8.五天后觀察細胞轉化和生長情況，決定是否半量換液。一般半量換液1-2次，并維持環(huán)胞霉素的濃度。

　　9.待轉化細胞數量明顯上升，并出現細胞團塊后，可轉入25ml細胞培養(yǎng)瓶中，加1-2ml培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10-15天，一般每隔3-4天觀察一次，決定是否換液，傳代。

　　10.細胞生長達一定數量后凍存，凍存前應進行核型分析和存檔。

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