ATCC細(xì)胞株培養(yǎng)操作：

　　將凍存的ATCC細(xì)胞株從有干冰的包裝中取出，理解復(fù)蘇培養(yǎng)，或迅速轉(zhuǎn)移放置在液氧罐氣相層在——130°C以下的度存儲(chǔ)。

　　1、先準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)皿或細(xì)胞株培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說(shuō)明推薦的相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基。并在37°c水浴中預(yù)先溫?zé)峒?xì)胞培養(yǎng)基

　　2、小心取出裝有細(xì)胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋一下的部分置于37°C水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過(guò)程應(yīng)該盡快，大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛?cè)诨蛻?yīng)該將細(xì)胞凍存管取出水浴。

　　3、在從水浴中取出的細(xì)胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用于菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無(wú)菌條件下生物安全柜中嚴(yán)格操作。

　　4、小心擰干凍存管的頂部，將管內(nèi)容物用1MI移槍轉(zhuǎn)移到9毫升培養(yǎng)基的無(wú)菌離心管中。離心5到7分鐘（125*g）.小心吸去上清液以去除抗凍劑（二甲基亞砜），避免丟失細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細(xì)胞均勻的分布。生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞株可重懸于5——8mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T125培養(yǎng)瓶。生長(zhǎng)較快的細(xì)胞株可重懸于12——20mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。

　　5、將細(xì)胞培養(yǎng)容器置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，在溫度37°C二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進(jìn)行卵育。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)候后應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞株形態(tài)和生長(zhǎng)狀況 。

　　ATCC細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。從培養(yǎng)代數(shù)來(lái)講，可培養(yǎng)到40-50代。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長(zhǎng)穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

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